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原核蛋白表达服务
发布时间：2013/10/30 21:08:51 浏览次数：原核蛋白表达系统是迄今为止最为成熟可靠的蛋白表达系统，能快速表达纯化各种不同来源蛋白。所制备的重组蛋白可用于药物筛选、结构生物学研究、细胞生物学研究、蛋白质组学研究等的一系列生物医学领域的研究。淘普生物拥有丰富的大肠杆菌表达系统和纯化系统， 致力于表达条件的优化和包涵体复性的摸索，可以为广大科研用户提供完善的服务。
淘普生物科技提供的大肠杆菌表达纯化服务包括表达质粒的构建，质粒转化及高表达菌株筛选，转化菌摇瓶培养，诱导表达，包涵体复性，目标蛋白纯化，SDS-PAGE 检测表达及纯化情况。服务编号：CPSProtein040 价格 ：询价
主要步骤 内容 交付内容 交付时间 目标基因全基因合成 1. 从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。
2. 根据选用的表达系统对cDNA进行密码子，mRNA二级结构等的优化。
3. 合成设计好的基因序列。目的基因 （在T载体或常规穿梭载体上）及测序报告。 2周 目标基因亚克隆 1. 扩增并抽提含有目标基因的载体质粒。
2. 将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上。
3. 测序验证构建质粒的准确性。
4. 可提供表达载体（PET系列为主）。正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。 2-3周 E. coli 表达菌株转化及筛选 1. 扩增并抽提构建好的表达质粒。
2. 将表达质粒转化到高效的E. coli表达菌株中。
3. 至少挑选5个阳性克隆于LB培养基中扩增并选择合适的条件，SDS-PAGE 检测蛋白表达情况，筛选出合适菌株。
4. 可提供表达菌株：DH5α, Top10, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue等。重组质粒的表达菌株及表达检测报告 2-3周 目标蛋白表达及纯化 1. 对时间，温度以及IPTG浓度等表达条件进行优化，诱导表达目标蛋白。
2. 摇瓶培养1L重组细菌，通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等层析方法纯化表达的重组蛋白。
3. 利用蛋白酶去除不需要的纯化标签（Tag），再纯化获得所需的目标蛋白（可选，构建表达载体需 加入合适的蛋白酶切位点）。
4. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。
5. .通过Western-blot验证目标蛋白正确性。纯化好的目标蛋白1~5mg及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签（Tag）或切除纯化标签（Tag）的最终蛋白，纯度最高可达95%以上。 2-3周 目标蛋白的再加工及详细检测 1. 对生物学活性要求较高的纯化后蛋白产品进行复性研究。
2. 内毒素去除，除菌，冻干等进一步加工。
3. 通过HPLC，质谱等方法详细检测目标蛋白的质量加工后的终产品及相关实验和检测报告。 2-3周 大规模制备 按照小试工艺放大生产规模，制备客户需要的合格蛋白产品。 合格的目标蛋白及服务报告。 协商 
服务流程：
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