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原核蛋白表达服务

发布时间:2013-10-30 21:08:51  浏览次数:

    原核蛋白表达系统是迄今为止最为成熟可靠的蛋白表达系统,能快速表达纯化各种不同来源蛋白。所制备的重组蛋白可用于药物筛选、结构生物学研究、细胞生物学研究、蛋白质组学研究等的一系列生物医学领域的研究。淘普生物拥有丰富的大肠杆菌表达系统和纯化系统, 致力于表达条件的优化和包涵体复性的摸索,可以为广大科研用户提供完善的服务。
    淘普生物科技提供的大肠杆菌表达纯化服务包括表达质粒的构建,质粒转化及高表达菌株筛选,转化菌摇瓶培养,诱导表达,包涵体复性,目标蛋白纯化,SDS-PAGE 检测表达及纯化情况。

服务编号:CPSProtein040                                                                价格 :询价

主要步骤 内容 交付内容   交付时间
 目标基因全基因合成   1. 从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。
2. 根据选用的表达系统对cDNA进行密码子,mRNA二级结构等的优化。
3. 合成设计好的基因序列。
  目的基因 (在T载体或常规穿梭载体上)及测序报告。 2周
目标基因亚克隆   1. 扩增并抽提含有目标基因的载体质粒。
2. 将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上。
3. 测序验证构建质粒的准确性。
4. 可提供表达载体(PET系列为主)。
正确构建的重组表达质粒,含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。   2-3周
  E. coli 表达菌株转化及筛选   1. 扩增并抽提构建好的表达质粒。
2. 将表达质粒转化到高效的E. coli表达菌株中。
3. 至少挑选5个阳性克隆于LB培养基中扩增并选择合适的条件,SDS-PAGE 检测蛋白表达情况,筛选出合适菌株。
4. 可提供表达菌株:DH5α, Top10, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue等。
重组质粒的表达菌株及表达检测报告 2-3周
目标蛋白表达及纯化 1. 对时间,温度以及IPTG浓度等表达条件进行优化,诱导表达目标蛋白。
2. 摇瓶培养1L重组细菌,通过亲和,离子交换,疏水及凝胶过滤等层析方法纯化表达的重组蛋白。
3. 利用蛋白酶去除不需要的纯化标签(Tag),再纯化获得所需的目标蛋白(可选,构建表达载体需 加入合适的蛋白酶切位点)。
4. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。
5. .通过Western-blot验证目标蛋白正确性。
纯化好的目标蛋白1~5mg及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签(Tag)或切除纯化标签(Tag)的最终蛋白,纯度最高可达95%以上。 2-3周
目标蛋白的再加工及详细检测   1. 对生物学活性要求较高的纯化后蛋白产品进行复性研究。
2. 内毒素去除,除菌,冻干等进一步加工。
3. 通过HPLC,质谱等方法详细检测目标蛋白的质量
  加工后的终产品及相关实验和检测报告。 2-3周
大规模制备 按照小试工艺放大生产规模,制备客户需要的合格蛋白产品。 合格的目标蛋白及服务报告。 协商

 

 

服务流程:
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3.邮件联系: sales@top-peptide.com

淘普(上海)生物科技有限公司