在线客服
产品咨询
点击这里给我发消息
销售顾问
点击这里给我发消息
销售经理
点击这里给我发消息

产品中心 Top-Peptide

当前的位置:首页 >> 产品中心 >> 蛋白

真核蛋白表达服务

发布时间:2013-10-30 21:08:43  浏览次数:

   一些复杂蛋白在翻译后需要被修饰,才具有天然构象和生物活性。而哺乳动物细胞可通过合适的机制对表达蛋白进行翻译后修饰和折叠。因此, 如果在您的实验过程中,出现关键性蛋白折叠问题或E.coli 在充裕的时间内仍无法表达蛋白,或表达的蛋白质量不高等问题时,我们推荐您使用哺乳动物细胞表达系统。淘普生物的哺乳动物细胞表达专家可以帮助您从获取感兴趣基因做起,构建真核表达质粒,瞬时或稳定转染动物细胞,检测蛋白表达,建立稳定表达重组蛋白的单克隆细胞系。

服务编号:CPSProtein042                                                        价格:询价

主要步骤 内容 交付内容 交付时间
目标基因全基因合成 1. 从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。
2. 根据选用的表达系统对cDNA进行密码子,mRNA二级结构等的优化。
3. 合成设计好的基因序列。
目的基因 (在T载体或常规穿梭载体上)及测序报告。 2周
目标基因亚克隆到哺乳动物细胞表达载体 1. 扩增并抽提含有目标基因的载体质粒。
2. 将目标基因亚克隆到真核表达载体上。
3. 测序验证构建质粒的准确性。
4. 通过中抽获得重组的质粒DNA
正确构建的重组表达质粒,含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。 2周
小量转染并通过Western-blot检测表达 1. 利用转染试剂将重组质粒转入合适的哺乳动物细胞中。
2. 从转染后24到72小时,每12小时取样,通过SDS-PAGE和Western-blot检测目标蛋白表达情况。
3. 可提供表达细胞株:293,293T,NIH/3T3,COS-7,CHO。
目标蛋白表达结果 2周
目标蛋白表达及纯化 1. 培养500ml哺乳动物细胞,然后将重组质粒转染到细胞中,通过瞬时表达产生目标蛋白。
2. 收集含有目标蛋白的部分(细胞或培养上清)。
3. 通过亲和,离子交换,疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
4. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。
5. 通过Western-blot验证目标蛋白正确性。
纯化好的目标蛋白及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签(Tag)或切除纯化标签(Tag)的最终蛋白,纯度最高可达80%以上。 3-4周
目标蛋白的再加工及详细检测 1. 内毒素去除,除菌,冻干等进一步加工。
2. 通过HPLC,质谱等方法详细检测目标蛋白的质量。通过亲和,离子交换,疏水及凝胶过滤等多种 层析方法纯化表达的重组蛋白。
加工后的终产品及相关实验和检测报告。 2-3周
筛选稳定高表达细胞株 1. 将转染后的哺乳动物细胞团转到96孔细胞培养板内,然后加入含有MTX的培养基。
2. 当细胞长到大约2/3孔时,取培养上清检测表达。
3. 挑出高表达的细胞团用于下一轮筛选,并在下一次细胞培养基中提高MTX的浓度。
4. 重复加压筛选过程,提高细胞株的表达量直到获得合适的稳定表达株。
5. 通过SDS-PAGE电泳检测每步表达结果。
6. 通过Western-blot验证目标蛋白正确性。
稳定的高表达细胞株及筛选报告 6-8周
大规模制备 按照小试工艺放大生产规模,制备客户需要的合格蛋白产品。 合格的目标蛋白及服务报告。

协商

 

 

 

 

服务流程:
您可以通过多种方式和我们联系

1.在线客服;
2.电话订购: 021-51353134
3.邮件联系: sales@top-peptide.com

淘普(上海)生物科技有限公司