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酵母蛋白表达服务

发布时间:2013-10-30 21:08:34  浏览次数:

    酵母蛋白表达系统结合了原核和真核蛋白表达系统的优点,是大规模生产重组真核蛋白的最佳模式。我们的酵母蛋白表达系统集高产量、高效和类似哺乳动物表达系统的特点为一体,蛋白表达持久、稳定。

服务编号:CPSProtein041                                                价格:询价

主要步骤 内容 交付内容 交付时间
目标基因全基因合成 1. 从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。
2. 根据选用的表达系统对cDNA进行密码子,mRNA二级结构等的优化。
3. 合成设计好的基因序列。
目的基因 (在T载体或常规穿梭载体上)及测序报告。 2周
目标基因亚克隆 1. 扩增并抽提含有目标基因的载体质粒。
2. 将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上。
3. 测序验证构建质粒的准确性。
4. 可提供表达载体(PET系列为主)。
正确构建的重组表达质粒,含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。 2-3周
毕赤酵母表达菌株电转化 1. 酶切线性化表达质粒。
2. 将表达质粒通过电转化到高效的毕赤酵母表达菌株中。
3. 通过PCR鉴定至少挑选5个阳性克隆。
4.可提供表达菌株:X33,GS115,KM71和SMD1168。
PCR阳性克隆及PCR结果报告 2周
毕赤酵母表达菌株筛选 1. 将5个阳性克隆于BMGY培养基中扩增,然后换至BMMY培养基中,并加入甲醇诱导表达目标蛋白。
2. SDS-PAGE电泳检测培养上清中目标蛋白的表达情况,并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达
3. 如果培养上清中检测不到表达,则通过将上清浓缩20倍作用再检测,或通过Western-blot方法检测目标蛋白表达(客户需要提供相关抗体)。
阳性克隆菌株及表达筛选结果报告。 2周
毕赤酵母表达菌株表达优化 1. 挑选20个阳性克隆进行常规表达筛选,并对其中表达最好菌株优化表达条件。
2. 对挑选出来的单克隆菌株,优化培养及诱导条件(培养基,菌体密度,甲醇浓度,诱导时间等),提高目标蛋白的表达量。
三个阳性克隆菌株及优化表达条件结果报告。 2周
目标蛋白的再加工及详细检测 1. 内毒素去除,除菌,冻干等进一步加工。
2. 通过HPLC,质谱等方法详细检测目标蛋白的质量。
加工后的终产品及相关实验和检测报告 2周
大规模制备 按照小试工艺放大生产规模,制备客户需要的合格蛋白产品。 合格的目标蛋白及服务报告

协商

 

 

服务流程:
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3.邮件联系: sales@top-peptide.com

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